چکیده:
مقدمه : باتوجه به افزایش تقاضا برای پیوند کبد و کمبود اهداکنندگان عضو، تولید بافت کبد از طریق روشهای مهندسی بافت کبد و کشت سه بعدی مورد بررسی قرار گرفته است . مطالعه حاضر با هدف جداسازی، استخراج و تمایز سلولهای بنیادی مزانشیمی بند ناف به هپاتوسیت ها و ارزیابی مارکرهای سلولی و بررسی رفتار و عملکرد آنها طراحی گردید. مواد و روشها: سلولهای بنیادی مزانشیمی از بندناف، استخراج و جداسازی شد و بررسی مارکرها و فنوتیپ سلولهای بنیادی از طریق فلوسیتومتری انجام شد. سپس در طی یک دوره ١٤ روزه، سلولها تحت چهار مرحله تمایز با عامل رشد فیبروبلاستی (FGF4)4، عامل رشد هپاتوسیتی (HGF)، دگزامتازون (DEX)، انسولین - ترانسفرین - سلنیوم (ITS)، گلوکاگون (GLU) انکوستاتین (OSM) و تریکواستاتین (TSA) قرار گرفتند.سپس به وسیله الیزا تولید اوره توسط سلولها اندازهگیری شد. همچنین جهت بررسی بافت شناسی تمایز، مقاطع کشت سه بعدی، تهیه و به وسیله روش هماتوکسیلین . ائوزین ، رنگ آمیزی شد. نتایج : سلولهای حاصل از ژله وارتون، مارکرهای سطحی مزانشیمی مانند CD73 را نشان داند اما این سلولها فاقد مارکرهای سطحی سلولهای خونساز مانند CD31 بودند. پس از تمایز چند مرحله ای سه بعدی، مورفولوژی سلولها گرد شد و در داربست آلژیناتی ، تجمعات سلولی به دلیل نزدیک شدن سلولها دیده شد. مقادیر اوره در هر دو کشت سه بعدی و دو بعدی به طور معنی داری در الگوی وابسته به زمان افزایش یافت . در عین حال، مقادیر اوره در کشت سه بعدی نسبت به کشت دو بعدی بیشتر بود (0.001=P). با بررسی بافت شناسی مقاطع درکشت سه بعدی، بافتی پرسلول با دستجات و صفحات سلولی با هسته یوکروماتین دیده شد. نتیجه گیری: نتایج این مطالعه نشان داد که تمایز ٤ مرحله ای سلولهای بنیادی با استفاده از داربست هیدروژلی باعث ظهور ویژگی های عملکردی و مورفولوژیکی سلولهای هپاتوسیتی مانند ترشح اوره و ایجاد صفحات سلولی شبه کبدی می گردد.
خلاصه ماشینی:
"چهار مرحله تمایز سلول های بنیادی مزانشیمی حاصل از بندناف به هپاتوسیت ها در داربست هیدروژلی سعید آزنده ١، آنه محمد غراوی ٢، محمود اوراضی زاده *١، محمود هاشمی تبار١، علی اکبر شایسته ٣، علی خدادادی ٤، داریوش بیژن نژاد 1 ١- دانشگاه علوم پزشکی جندی شاپور اهواز- دانشکده پزشکی - گروه علوم تشریحی - مرکز تحقیقات سلولی مولکولی .
نتیجه گیری: نتایج این مطالعه نشان داد که تمایز ٤ مرحله ای سلولهای بنیادی با استفاده از داربست هیدروژلی باعث ظهور ویژگی های عملکردی و مورفولوژیکی سلولهای هپاتوسیتی مانند ترشح اوره و ایجاد صفحات سلولی شبه کبدی می گردد.
جداسازی ، استخراج و تمایز سلول های بنیادی مزانشیمی بندناف در دو اگرچه یکی از ویژگی های مهم کبد توانایی بازسازی آن است اما گاهی سیستم کشت دو بعدی و سه بعدی در شرایط آزمایشگاهی به اوقات ، سلول های کبدی دچار نقص شدید و بیماری شده و نیاز به هپاتوسیت ها و همچنین ارزیابی مارکرهای هپاتوسیت ها و بررسی رفتار جایگزینی دارند.
(هپاتوسیت ) در شرایط کشت دو بعدی صورت گرفته و مطالعات تمایز سلول ها: برای تمایز هپاتوژنیک ، سلول های بنیادی مزانشیمی محدودی تمایز سه بعدی این سلول ها با استفاده از داربست ها را مورد ٥ بار پاساژ شده و در طی یک دوره ١٤ روزه تحت چهار مرحله تمایز بررسی قرار داده اند.
جدول ١- تمایز هپاتوژنیک ، سلول های بنیادی مزانشیمی تحت چهار نتایج مرحله تمایز با (FGF4)،HGF( )،DEX( )،ITS( )،OSM( )GLU( )،TSA( ) فلوسیتومتری : یافته های فلوسیتومتری نشان داد که سلول های مدت زمان (روز) سایتوکاین و عوامل رشد به کار رفته محیط کشت حاصل از ژله وارتون ، مارکرهای سطحی مزانشیمی مانند CD73 را ٢تا ٤ DMEM."